18. Article
Baktērijas DNS izdalīšana:
18.1. ievieto 220 μl
lizēšanas bufera mikromēģenē;
18.2. pievieno 100 μl paraugu
ekstrakta;
18.3. paraugu inkubē 95 °C
temperatūrā 10 minūtes;
18.4. turpina parauga inkubēšanu
uz ledus 5 minūtes;
18.5. pievieno 80 μl lizozīma
koncentrāta;
18.6. inkubē paraugu 37 °C 30
minūtes;
18.7. pievieno 220 μl
EasyDNA šķīduma A, invertē paraugu;
18.8. inkubē 65 °C 30 minūtes;
18.9. pievieno 100 μl
EasyDNA šķīduma B, invertē paraugu, līdz veidojas viskozs
šķīdums;
18.10. pievieno 500 μl
hloroforma un labi sakrata;
18.11. centrifugē paraugu (15000
g) 20 minūtes +4 °C temperatūrā;
18.12. virsējo fāzi pārnes jaunā
mikromēģenē;
18.13. pievieno 1 ml atdzesēta
(-20 °C) 96% etanola;
18.14. centrifugē paraugu (15000
g) 20 minūtes +4 °C temperatūrā;
18.15. nolej šķidro fāzi;
18.16. pievieno 500 μl
atdzesēta (-20 °C) 80% etanola;
18.17. centrifugē paraugu (15000
g) 20 minūtes +4 °C temperatūrā;
18.18. nolej šķidro fāzi;
18.19. žāvē nogulsnes istabas
temperatūrā;
18.20. nogulsnes šķīdina 100
μl sterila destilēta ūdens;
18.21. inkubē paraugu istabas
temperatūrā 20 minūtes;
18.22. pārvieto paraugu -20 °C
temperatūrā turpmākai uzglabāšanai.
- g)) 20 minūtes +4 °C temperatūrā;
- g)) 20 minūtes +4 °C temperatūrā;
- g)) 20 minūtes +4 °C temperatūrā;
asjoint-stock