2. Article

Paraugu sagatavošana testēšanai: 2.1. kartupeļu bumbuļus pārskaita, nomazgā un ļauj tiem apžūt; 2.2.ar dezinficētu skalpeli noņem kartupelim mizu stolona piestipri nāšanas vietā un izgriež 3-5 mm lielus vadaudu gabaliņus; 2.3.vadaudu gabaliņus ievieto vienreiz lietojamā traukā un pārlej ar 40-50 ml macerācijas buferšķīduma. Ieteicams izgrieztos audus apstrādāt nekavējoties. Ja tūlītēja apstrāde nav iespējama, paraugu uzglabā līdz 72 stundām +4°C līdz +10°C temperatūrā vai līdz 24 stundām istabas temperatūrā; 2.4.paraugu četras stundas inkubē kratītājā ar 50 līdz 100 apgriezieniem minūtē; 2.5.macerātu nolej un koncentrē baktērijas, centrifugējot paraugu (10000 g) 10 minūtes +4 °C līdz +10 °C temperatūrā; 2.6.nolej centrifugāta šķidrumu, neskarot nogulsnes. Iegūtās nogulsnes šķīdina 1,5 ml nogulšņu buferšķīdumā, un paraugu sadala tālākām analīzēm: 2.6.1.1000 μl izmanto baktēriju Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus un Pseudomonas solanacearum noteikšanai; 2.6.2.500 μl uzglabā references nolūkiem. Parauga references daļai pievieno 200 μl sterila glicerīna, samaisa un uzglabā -75°C līdz -85°C temperatūrā; 2.7.testēšanas laikā izgriezto vadaudu paraugu un nogulšņu suspensiju uzglabā +4°C līdz +10 °C temperatūrā. II. Imunofluorescences tests 3.Imunofluorescences (turpmāk - IF) testā izmanto daudzlodziņu mikroskopa priekšmetstikliņus. Uz priekšmetstikliņiem ar zīmuli uzraksta CMS un parauga identifikācijas numuru. 4.Sagatavo nogulšņu decimālus atšķaidījumus 1/10, 1/100 un 1/1000. Mēģeni ar nogulsnēm sajauc vorteksā. Ar pipeti uzpilina nogulšņu un katra atšķaidījuma standarta daudzumu - 20 ml - lodziņu rindai (tabula). Atlikušo rindu izmanto par dublikātu vai otrajam paraugam. Tabula Neatšķaidīts 1/10 1/100 1/1000 1.paraugs 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 1.parauga dublikāts vai 2.paraugs 2 6 2 7 2 8 2 9 2 10 5.Sagatavo atsevišķu pozitīvās kontroles priekšmetstikliņu (tāpat kā paraugu). Negatīvai kontrolei izmanto nogulšņu buferšķīdumu. To pilina 5. un 10.priekšmetstikliņa acī neatšķaidītu. Katram testu komplektam izmanto vienu priekšmetstikliņu.