453. Article

Heksamidīna, dibromheksamidīna, dibrompropamidīna un hlorheksi dīna kvantitatīvu noteikšanu veic šādā kārtībā: 453.1. Gatavojot standarta šķīdumu, izmanto vienu no konservantiem (450.6., 450.7., 450.8. vai 450.9.apakšpunkts), kura nav paraugā iekšējā stan darta veidā. Ja tas nav iespējams, var izmantot triklokarbānu vai halokarbānu: 453.1.1. Šī pielikuma 452.3.apakšpunktā pierādītā konservanta 0,05 % (m/v) rezerves šķīdums šķīdinātājā I (450.5.1.apakšpunkts). 453.1.2. 0,05 % (m/v) rezerves šķīdums konservanta, kas izvēlēts kā iekšējais standarts, šķīdinātājā I (450.5.1.apakšpunkts). 453.1.3. Katram pierādītajam konservantam sagatavo četrus standartšķīdu mus, pārnesot uz vairākām 10 ml mērkolbām attiecīgo konservantu (453.1.1.apakš punkts) rezerves šķīdumus un attiecīgus daudzumus iekšējā standarta rezerves šķīduma (453.1.2.apakšpunkts) saskaņā ar šajā punktā norādīto tabulu. Katru kolbu uzpilda līdz atzīmei ar šķīdinātāju I (450.5.1.apakšpunkts) un sajauc. Standartšķīdums Iekšējā standarta rezerves šķīdums Pierādītā konservanta rezerves šķīdums (453.1.2.apakšpunkts) pievienotie ml (453.1.1.apakšpunkts) pievienotie ml μg/ml (*) I 1,0 0,5 25 II 1,0 1,0 50 III 1,0 1,5 75 IV 1,0 2,0 100 (*) Šīs vērtības atbilst pierādīto konservantu koncentrācijai standartšķīdumos, kas gatavoti, izmantojot rezerves šķīdumu, kas satur tieši 0,05 % pierādītā konservanta. 453.2. Parauga sagatavošana: 453.2.1. Precīzi iesver aptuveni 0,5 g (p gramus) parauga 10 ml mērkolbā, pievieno 1,0 ml iekšējā standarta šķīduma (453.1.2.apakšpunkts) un 6 ml šķīdinātāja I (450.5.1.apakšpunkts) un sajauc. 453.2.2. Kolbu uz 10 minūtēm ieliek ultraskaņas vannā. Atdzesē. Uzpilda līdz atzīmei ar šķīdinātāju I un sajauc. Centrifugē vai filtrē caur kroku filtrpapīru. Savāc attiecīgi centrifugātu vai filtrātu hromatogrāfijai. 453.3. Hromatogrāfija: 453.3.1. Noregulē mobilās fāzes gradientu, plūsmas ātrumu, kolonnas temperatūru un HPLC iekārtas detektora viļņu garumu atbilstīgi nosacījumiem pierādīšanas stadijā (452.2.1., 452.2.2. un 452.2.3.apakšpunkts). 453.3.2. Iesmidzina 10 ml paraugšķīduma (453.2.2.apakšpunkts) un izmēra pīķu laukumus. Šo procedūru atkārto ar parauga šķīduma 10 ml alikvotām daļām, līdz iegūst konsekventus rezultātus. Aprēķina tā pīķa laukuma, kas radies no analizējamā savienojuma, attiecību pret tā pīķa laukumu, ko rada iekšējais standarts. 453.4. Kalibrēšana: 453.4.1. Iesmidzina 10 ml no katra standartšķīduma (453.1.3.apakš punkts) un izmēra pīķu laukumus. 453.4.2. Atbilstīgi katram standartšķīdumam (453.1.3.apakšpunkts) aprēķina heksamidīna, dibromheksamidīna, dibrompropamidīna vai hlorheksidīna pīķu laukuma attiecību pret iekšējā standarta pīķu laukumu. Uzzīmē kalibrēšanas līkni, šīs attiecības izmantojot par ordinātu un attiecīgās kvalitatīvi noteiktā konservanta koncentrācijas standartšķīdumos mikrogramos uz mililitru par abscisu. 453.4.3. No kalibrēšanas līknes (453.4.2.apakšpunkts) nolasa pierādītā konservanta koncentrāciju, kas atbilst pīķu laukumu attiecībai, kas aprēķināta saskaņā ar šī pielikuma 453.3.2.apakšpunktu.