475. Article

Propionskābes kvantitatīvu noteikšanu veic šādā kārtībā: 475.1. Parauga gatavošana: 475.1.1. Parauga gatavošana bez iekšējā standarta: 475.1.1.1. Stikla mēģenē iesver aptuveni 1 g parauga. 475.1.1.2. Pievieno 0,5 ml fosforskābes un 9,5 ml etanola. 475.1.1.3. Noslēdz mēģeni un spēcīgi sakrata. Ja nepieciešams, lai pilnīgi izšķīstu lipīdu fāze, liek mēģeni uz piecām minūtēm ūdens vannā, kur ir 60 °C. Ātri atdzesē tekošā ūdenī. 475.1.1.4. Izfiltrē daļu šķīduma ar membrānfiltru. 475.1.1.5. Filtrātam veic hromatogrāfiju tajā pašā dienā. 475.1.2. Parauga gatavošana, pievienojot iekšējo standartu: 475.1.2.1. Ar precizitāti līdz trešajai zīmei aiz komata stikla mēģenē iesver 1±0,1 g (a grami) parauga. 475.1.2.2. Pievieno 0,5 ml fosforskābes un 0,50 ml iekšējā standarta šķīduma un 9 ml etanola. 475.1.2.3. Noslēdz mēģeni un spēcīgi sakrata. Ja nepieciešams, lai pilnīgi izšķīstu lipīdu fāze, liek mēģeni uz piecām minūtēm ūdens vannā, kur ir 60 °C. Ātri atdzesē tekošā ūdenī. 475.1.2.4. Izfiltrē daļu šķīduma ar membrānfiltru. 475.1.2.5. Filtrāta hromatogrāfiju veic tajā pašā dienā. 475.2. Veicot gāzu hromatogrāfiju, ieteicami ir šādi darba apstākļi: 475.2.1. Kolonna: 475.2.1.1. Nerūsējošs tērauds. 475.2.1.2. Garums 2 m. 475.2.1.3. Diametrs 1/8". 475.2.1.4. Pildījums 10 % SP™ 1000 (vai līdzvērtīgs) + 1 % H3PO4 uz Chromosorb WAW ar daļiņu izmēru 100-120. 475.2.2. Temperatūra: 475.2.2.1. Inžektors: 200 °C. 475.2.2.2. Kolonna: 120 °C. 475.2.2.3. Detektors: 200 °C. 475.2.2.4. Nesējgāze: slāpeklis. 475.2.2.5. Plūsma: 25 ml/min. 475.3. Hromatogrāfija: 475.3.1. Kalibrēšana: 475.3.1.1. Uz kalibrētām 20 ml kolbām ar pipeti attiecīgi pārnes 0,25, 0,50, 1,00, 2,00 un 4,00 ml propionskābes šķīduma (atbilstoši šā pielikuma 473.5.apakšpunktam). 475.3.1.2. Ar pipeti uz katru mērkolbu pārnes 1,00 ml iekšējā standarta šķīduma (atbilstoši šā pielikuma 473.6.apakšpunktam), uzpilda līdz zīmei ar etanolu un sajauc. Tā sagatavotajos šķīdumos ir e mg/ml 2-metilpropionskābes, kas ir iekšējais standarts (t.i., 1 mg/ml, ja e = 1000) un p/4, p/2, p, 2p, 4p mg/ml propionskābes (t.i., 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 4,00 mg/ml, ja p = 1000). 475.3.1.3. Ievada 1 µl katra šī šķīduma un, atzīmējot propionskābes/2-metilpropionskābes masas attiecību uz x ass un attiecīgo pīķu laukumu attiecību uz y ass, iegūst kalibrēšanas līkni. 475.3.1.4. Katru šķīdumu ievada trīs reizes un aprēķina vidējo pīķu laukumu attiecību. 475.3.2. Kvantitatīva noteikšana: 475.3.2.1. Ievada 1 µl parauga filtrāta (atbilstoši šā pielikuma 475.1.1.apakšpunktam). 475.3.2.2. Salīdzina hromatogrammu ar viena standarta šķīduma hromatogrammu (atbilstoši šā pielikuma 475.3.1.apakšpunktam). Ja kāda pīķa izdalīšanas laiks ir aptuveni vienāds ar 2-metilpropionskābei atbilstīgo izdalīšanas laiku, tad nomaina iekšējo standartu. Ja nav nekādu traucējošu faktoru, ievada 1 µl parauga filtrāta (atbilstoši šā pielikuma 475.1.2.apakšpunktam) un izmēra propionskābes pīķa un iekšējā standarta pīķa laukumu. 475.3.2.3. Katru šķīdumu ievada trīs reizes un aprēķina vidējo pīķu laukumu attiecību.